Цвет бактерий, грамположительные и грамотрицательные бактерии

Цвет бактерий, грамположительные и грамотрицательные бактерии

Диахим — Набор для окраски по Граму (с фуксином Циля)

Набор реагентов для окраски микроорганизмов по Граму (с фуксином Циля)

Назначение

Набор реагентов для окраски по Граму предназначен для окраски микроорганизмов и выявления принадлежности бактерий к грамположительным или к грамотрицательным группам.

Принцип реакции

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристалвиолет.

Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (-) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Реагенты

Набор обеспечивает 200 исследований (при расходе 0,5 мл реагента на одно исследование).

  1. Карболовый раствор генцианвиолета 1 фл (100 мл)
  2. Раствор Люголя 1 фл (100 мл)
  3. Фуксин Циля 1 фл (10мл)

Подготовка к анализу

Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол пр-ва «АБРИС+».

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе .

Либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх.

Приготовление рабочего раствора фуксина Циля

Перед использованием фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой. (Из расчета — к 1 мл фуксина добавляют 9 мл дистиллированной воды).

Методика окраски

  1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдерживают 2-3 минуты. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и споласкивают в проточной воде (до 30 сек).
  2. Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата.
  3. Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной).
  4. Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают. Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 сек. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с.
  5. Тщательно промывают стекло в проточной или дистиллированной воде 1-2 мин
  6. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают рабочим фуксином Циля (несколько капель) в течение 1-3 минут.
  7. Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

Результат окраски

Грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные — розово-красный, красный или коричневый.

Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка ( по Граму)

Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»

Срок выполнения: 1-2 рабочих дня

  • Описание
  • Подготовка
  • Показания
  • Интерпретация результатов

Бактериоскопия (Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму) – это метод, в основе которого лежит исследование бактерий под микроскопом. Это быстрый метод диагностики, который широко используется врачами разных специальностей при подозрении на наличие бактериального инфекционного процесса.

Важно понимать, что бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму является не совсем специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также, определения его чувствительности к антибиотикам, необходимо проведение бактериального посева.

Бактериоскопия широко используется как в терапии, так и в акушерско-гинекологической практике.

В зависимости от типа, бактерии можно разделить на Грам положительные и Грам отрицательные. Есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму. В зависимости от расположения в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов), спектр бактерий меняется.

Например, при исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса, данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируетс рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе, как правило, имеет место коккобацилярная грамвариабельная микрофлоры. При гонорее в мазке будут присутствовать грамотрицательные кокки бобовидной формы, расположенные парами (по типу «кофейных зерен»). При других гнойных заболеваниях (не отличающихся специфичностью клиники и возбудителя), при микроскопии, в зависимости от этиологии, встречаются как грамположитеьные, так и грамотрицательные палочки. Помимо выявления возбудителя, в мазке учитывается наличие клеток эпителия, количество лейкоцитов, присутствие ключевых клеток.

Если в качестве исследуемого материала используется мокрота, то обычно, в ней находят грамположитеьные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.

В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.

Таким образом, материалом для бактериоскопического исследования могут быть:

  • Гинекологические мазки у женщин, либо урологические мазки у мужчин (отделяемое из половых органов, мазки со слизистой уретры, влагалища и шейки матки у женщин, семенная жидкость у мужчин)
  • Другие локализации – мазки из носа, зева, исследование мокроты, плевральной жидкости, суставной жидкости, перитонеальной, гной и мазки из ран, отделяемое из уха, глаза и так далее.
Читайте также:  Лекарства и препараты для лечения ОРВИ обзор современных средств

Так как бактериоскопическое исследование не позволяет с высокой точностью определить возбудителя, после него необходимо проведение бактериологического посева содержимого на флору.

Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму позволяет врачу быстро сориентироваться в большом количестве возможных возбудителей и выбрать антибактериальный препарат для стартовой терапии, обладающий таким спектром, чтобы воздействовать на определнную группу бактерий, так как посев на флору требует нескольких дней для получения результата, а начать лечение необходимо непосредственно по факту обращения пациента за помощью.

Условия подготовки к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму определяется лечащим врачом и обусловлено тем, в какой области будет производиться забор биологического материала.

Важно проводить исследование до начала антибактериальной терапии.

Показанием к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму является наличие инфекционно-воспалительного процесса различной локализации (мочеполовой системы, легких и дыхательных путей, ЛОР-органов, глаз, слизистых оболочек любой локализации, раневых поверхностей и т.д.).

Основной целью данного исследования является выявление бактерий.

По результатам исследования выдается заключение, в котором отражено: наличие или отсутствие бактерий, тип бактерий (грамположительные, грамотрицательные и т.д.), оценка лейкоцитарной реакции (количество лейкоцитов), количественная оценка микрофлоры, другие возможные клеточные изменения.

Окраска по Граму в домашних условия

Эксперименты: Биология Анатомическое строение листа Вскрытие акулы Движение цитоплазмы Изучение спор сенной палочки Bacillus subtilis Лабораторный практикум по курсу биологии средней школ Методы и приемы биологического эксперимента Окраска по Граму в домашних условия Получение культуру сенной палочки Эксперименты по анатомии и физиологии животных Эксперименты по физиологии растений Явление плазмолиза и деплазмолиза

Модификации контрастной окраски по Граму для домашнего использования

Открытие, случайно сделанное более 100 лет назад датским физиком Кристианом Грамом, до настоящего времени остается одним из наиболее важных дифференциальных критериев в идентификации бактерий. Несмотря на относительную простоту постановки методики окраски, с одной стороны, и не совсем полную ясность ее механизма, с другой, окраска по Граму в подавляющем большинстве случаев достаточно четко дифференцирует две давно разделившиеся эволюционно ветви бактерий — грамположительные и грамотрицательные.

В настоящее время методика несколько упрощена и изменена. Оказалось, что не обязательно нужен для обесцвечивания препаратов абсолютный этанол, его вполне можно заменить 96% спиртом или ацетоном. Аналогично, нет необходимости в анилиновой воде, для этого сейчас обычно практикуют водопроводную. Вместо генцианового фиолетового и везувина стали почти повсеместно использовать кристаллический фиолетовый или метиленовый фиолетовый (основные красители) и нейтральный красный, реже фуксин (дополнительные красители). Единственное, что неизменно прочно занимает место в методике Грама, это йод, служащий надежной протравой. Его используют обычно в виде водных растворов с йодидом калия (раствор Люголя).

Примечание. В отечественной литературе название применяется к растворам йода любой концентрации в водных растворах йодида калия. В зарубежных источниках под наименованием обозначают раствор, где сочетание йод — йодид калия — вода выступает в соотношении 1:2:100, а соотношение компонентов 1:2:300 именуется . В аптечной сети продается , где сочетание компонентов 1:2:17.

Возможно, не все знают, что в качестве основного красителя помимо фиолетовых (кристаллический фиолетовый, метиленовый фиолетовый, генциановый фиолетовый) можно с успехом использовать, например, бриллиантовый зеленый. Он предложен, в частности, в модификации Г.П. Калины, при которой грамположительные бактерии приобретают зеленую окраску, а грамотрицательные — светло-розовую [1]. Получение сочетания цветов зеленый — красный более удачно в смысле контрастности, однако это не всегда удается. Например, такие дополнительные красители, как фуксин или нейтральный красный, особенно при длительной экспозиции, оказывают влияние на цвет основного (зеленого) красителя, что ведет к эволюции основной окраски от бирюзовой до фиолетовой. Грамположительные и грамотрицательные бактерии в этом случае утрачивают резкую контрастность. При малой же экспозиции получается очень бледная окраска, что затрудняет изучение грамотрицательных бактерий.

Мы хотим привести ряд методик для определения грампринадлежности бактерий, при которых получается зеленая окраска грамположительной флоры и красная грамотрицательной. Эти модифицированные способы отработаны на большом лабораторном материале и их можно с успехом использовать при бактериоскопической и культуральной диагностике.

Во всех четырех вариантах для основной окраски используется 0,5% раствор бриллиантового зеленого, для дополнительной — 0,25% раствор сафранина. Для приготовления 0,5% раствора бриллиантового зеленого берут 0,5 г красителя и растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воде, фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр. Допускается также использование коммерческого 1% спиртового раствора бриллиантового зеленого, который разводят наполовину дистиллированной водой. Фильтровать в этом случае не надо. 0,25% раствор сафранина делают так: вначале готовят исходный раствор, для чего 2,5 г красителя растворяют в 100 мл 96% спирта. Хранят в бутыли из темного стекла. Для приготовления рабочего раствора смешивают 1 часть спиртового раствора и 9 частей дистиллированной воды.

На зафиксированный мазок из исследуемого материала или из бактериальной культуры наносят на 1 мин 0,5% раствор бриллиантового зеленого. После промывания препарата водопроводной водой на мазок наносят водный раствор Люголя (1 г йода, 2 г йодида калия и 100 мл дистиллированной воды). Экспозиция 1 мин. После промывания приступают к обесцвечиванию препарата в ацетоне. Последнее проводят под контролем глаза, погружая и вынимая препарат из стакана с ацетоном. Обесцвечивание продолжают до тех пор, пока с тонких участков перестанут стекать зеленые струйки красителя. Препарат быстро вносят под струю водопроводной воды. Докрашивание проводят 0,25% раствором фуксина в течение 30 — 60 с. Препарат тщательно промывают и высушивают.

Читайте также:  Прайс-лист на услуги врача-урологии - Юнимед-С

При правильной окраске в препаратах тонкие участки должны быть оранжево-красного цвета, толстые — зеленого. В мазке из клинического материала ядра лейкоцитов, эпителиальных клеток могут частично удерживать зеленую окраску, цитоплазма должна быть оранжево-розового цвета. Гонококки, расположенные на этом фоне, должны быть оранжево-красными, при этом обращают внимание и на другие морфологические признаки (парность, отсутствие цепочек, групп и др.). Грамположительная флора окрашивается в различные оттенки зеленого цвета. В правильно окрашенных мазках из культур При наличии сочетанной грамположительной флоры (стафилококков, стрептококков и др.) последняя окрашивается в различные оттенки зеленого цвета (от изумрудно-зеленого до темно-зеленого).

Вариант 2. Отличается от 1-го варианта тем, что вместо 96% спирта для обесцвечивания используют йодный спирт (0,1% йода и 0,5% йодида калия в 96% или абсолютном спирте). Для обесцвечивания на окрашенный и протравленный мазок наносят йодный спирт в количестве, необходимом для покрытия препарата. С помощью пинцета несколько раз покачивают стекло так, чтобы спиртовой раствор несколько раз переместился над мазком. Время обесцвечивания примерно 10 с. Докрашивание и промывание препарата, как и в 1-м варианте.

Использование йодного спирта в данной модификации уменьшает вероятность за счет дополнительного протравливания и является несколько экономичнее в смысле расхода спирта.

Приготовление йодного спирта: 0,5% г йодида калия растворяют в 100 мл 96% спирта. Процесс растворения ускоряется, если флакон подогреть на водяной бане. К полученному раствору добавляют 0,1 г кристаллического йода и тщательно перемешивают. Хранят в бутыли из темного стекла в закрытом месте. Можно йодный спирт приготовить и так: к 98 мл спирта, лучше абсолютного, добавить 2 мл 5% настойки йода (коммерческой) и 0,46 г йодида калия.

Основная окраска и протравливание, как в 1-м варианте. Для обесцвечивания берут йод-ацетон по прописи Preston — Morrell [1]. Экспозиция йод-ацетона, нанесенного на стекло, 10 с. Препарат промывают и докрашивают, как в 1-м варианте.

Йод-ацетон, по имеющимся наблюдениям, гораздо быстрее спирта обесцвечивает грамотрицательную флору и медленнее грамположительную, что практически устраняет возможность даже при более длительной экспозиции. Однако из-за токсичности паров ацетона данную модификацию рекомендуется осуществлять только в лабораториях, оборудованных вытяжными шкафами.

При окраске грамположительная флора приобретает травянисто-зеленый оттенок, грамотрицательная — оранжевый.

На чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды и с помощью бактериологической петли вносят в нее немного суточной культуры бактерий. После перемешивания в мазок добавляют 1 — 2 петли 0,5% раствора бриллиантового зеленого и вновь тщательно перемешивают. Мазок оставляют до высыхания. Приготовленный препарат фиксируют жаром, пронося стекло несколько раз через пламя спиртовки. С помощью пипетки на препарат по каплям наносят йодный спирт (см. 2-й вариант) в количестве, необходимом для покрытия всей поверхности стекла. Стекло слегка покачивают пинцетом так, чтобы спиртовой раствор несколько раз переместился над мазком, после чего позеленевший реактив сливают. Препарат быстро вносят под струю водопроводной воды. Время воздействия йодного спирта примерно 10 с. Мазок из грамположительной флоры остается зеленым, из грамотрицательной светлеет вплоть до полного обесцвечивания. Докрашивают препарат, как в предыдущих вариантах.

Преимуществом варианта 4 является сокращение времени окрашивания за счет совмещения этапов: приготовление мазка совмещается с основным окрашиванием, а протравливание с обесцвечиванием. Достигается также экономия спирта, который, кстати, можно собирать после использования в отдельную посуду и использовать для горения спиртовки.

Во всех методиках, особенно в 4-м варианте, следует обратить внимание на недопустимость использования разбавленного этилового спирта, т.е. концентрации ниже 96%, иначе препараты будут . Лучше накануне выдержать используемый спирт во флаконе с безводным сульфатом меди, что позволит убрать из спирта избыток воды.

В заключение обращаем еще раз внимание, что приведенные модифицированные способы окраски по Граму достаточно просты в постановке, не требуют дефицитных реактивов и специального оборудования и могут быть рекомендованы как диагностики для гонореи, так и других бактериальных инфекций.

Вестник дерматологии и венерологии, N 6-1998, стр. 26-28.

1. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. Под ред. К.И. Матвеева, М.И. Соколовой. М 1964;49 — 57.

2. Степанюк В.В. Окраска бактерий по Граму: современная оценка, причины грамвариабельной окраски. Микробиол журн 1990;52:5:97 — 106.

3. Baker F.J., Breach M.R. Medical microbiological techniques. London 1980;13,14,504,507.

4. Smith A., Bruton J. A color atlas of histological staining techniques. London 1978;129 — 130.

Культуральный мазок по Граму в модификации Калины

На обезжиренное стекло наносят каплю стерильного физиологического раствора. В нем суспензируют культуру и туда же петлей вносят каплю спиртового раствора бриллиантовой зелени. После подсыхания препарат фиксируют над пламенем. Затем на препарат наливают основной краситель. Время экспозиции 1,5 — 2,0 мин. После этого краску сливают и стекло в наклонном положении промывают водой. Далее препарат в наклонном положении отмывают спиртом до отхождения облачков краски и немедленно промывают водой. Затем производят докрашивание препарата водным раствором фуксина в течение 2 мин, после этого окончательно промывают водой и просушивают. Культуральный мазок просматривают под иммерсией при большом увеличении: грамотрицательные бактерии выглядят ярко-розовыми, грамположительные — сине-черными.

Читайте также:  Девочки, что лучше синекод или аскорил

2.6 Приготовление концентрированного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000 см наливают 500 см дистиллированной воды, добавляют (34,00±0,01) г однозамещенного фосфорнокислого калия и тщательно перемешивают. Контролируют значение активной кислотности раствора и устанавливают требуемое значение рН, равное 7,2, раствором гидроокиси натрия массовой долей 20%. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (20±1) мин.

2.7 Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000 см помещают 1,25 см концентрированного раствора фосфатного буфера, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10 см3 в пробирки, по 93 см3 в колбы вместимостью 100см3, стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (20±1) мин и используют для приготовления разведений.

Приготовление реактивов для окраски по Граму (модификация Г.П.Калины)

Приготовление реактива 1

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,50±0,01) г кристаллического фиолетового, добавляют небольшое количество этилового спирта и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят этиловым спиртом до метки.

Приготовление реактива 2

К 96 см3 спиртового раствора йодистого калия массовой концентрацией 5 г/дм добавляют 2 см3 спиртового раствора основного фуксина массовой концентрацией 50 г/дм3 и 2 см3 спиртового раствора йода массовой концентрацией 50 г/д3. Приготовление спиртового раствора йодистого калия проводят на водяной бане при температуре (45±5) °С при постоянном помешивании.

Приготовление раствора метиленового голубого для окраски препаратов

Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого

В коническую колбу вместимостью 150 см3 помещают (10,00±0,01) г метиленового голубого, приливают 100 см3 96%-ного этилового спирта, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, затем фильтруют через сухой складчатый фильтр в термостате при той же температуре.

Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37±1) °С — не более 3 мес.

Приготовление рабочего раствора метиленового голубого для окраски препаратов

К 30 см3 основного спиртового раствора метиленового голубого, приготовленного по (____), добавляют 100 см3 дистиллированной воды и 1 см3 раствора гидроокиси калия массовой концентрацией 10 г/дм3.

Методы микроскопических исследований

1 Сущность метода

Метод основан на визуальном наблюдении микроорганизмов с помощью приборов (микроскопов), позволяющих многократно увеличивать подготовленный исследуемый объект.

При микроскопическом исследовании учитываются как жизнеспособные, так и нежизнеспособные клетки микроорганизмов, при этом чувствительность метода — не менее 10*5 клеток в 1 см3 или 1 г исследуемого образца.

2 Подготовка к проведению анализа

2.1 Приготовление микропрепарата.

Для приготовления препарата жидкого продукта на чистое предметное стекло наносят петлей каплю продукта и распределяют на площади 1-2 см2.

Приготовленные микропрепараты высушивают при комнатной температуре на воздухе.

2.2 Фиксирование микропрепарата

Для закрепления клеток микроорганизмов на стекле высушенные микропрепараты фиксируют. Для этого предметное стекло с высушенным микропрепаратом, обращенным вверх, берут пинцетом и проводят 3-5 раз через верхнюю часть пламени горелки с промежутками в 5-6 с. Зафиксированный микропрепарат охлаждают на воздухе.

2.3 Окрашивание микропрепарата метиленовым голубым

Зафиксированный микропрепарат помещают на подставку для окраски мазком вверх. Пипеткой наносят рабочий раствор метиленового голубого по 6.2.13.2 так, чтобы покрыть весь мазок, по истечении 30-60 с краситель осторожно сливают. Препарат промывают водой.

Окрашенный мазок высушивают на воздухе.

8.7.2.4 Окрашивание микропрепарата по Граму

Зафиксированный микропрепарат помещают на подставку для окраски мазком вверх, накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор кристаллического фиолетового по 6.2.11.2. Окраску проводят в течение 1-2 мин.

Снимают бумагу, сливают избыток красителя и, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя по 6.2.11.3 на 1-2 мин до почернения препарата.

Раствор Люголя сливают. Предметное стекло погружают несколько раз в этиловый спирт. Процесс обесцвечивания считается завершенным, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости.

Микропрепарат тщательно промывают водой.

Повторную окраску микропрепарата проводят водно-спиртовым раствором фуксина по 6.2.11.5 в течение 2 мин.

Подготовка микропрепаратов и окраска по Граму в модификации Г.П.Калины

На предметное стекло в каплю воды с внесенной агаровой культурой вносят петлей каплю реактива 1, приготовленного по 6.2.12.1. Смесь распределяют на площади 1-2 см2, просушивают при (20±2) °С и фиксируют по(____). Препарат ополаскивают водой и тщательно просушивают фильтровальной бумагой.

После просушивания на препарат наносят с избытком реактив 2, приготовленный по 6.2.12.2, чтобы жидкость покрывала всю поверхность стекла. Продолжительность окрашивания — 30-60 с. После окрашивания препарат ополаскивают проточной водой, направляя струю под углом на стекло, помещенное вертикально. Препарат просушивают фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы приобретают темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные — красный цвет.

Ссылка на основную публикацию
Хронический гастродуоденит что это такое, симптомы, лечение
Хронический гастрит: причины, симптомы и диагностика Хронический гастрит – это длительное воспалительное заболевание желудка. Оно характеризуется рецидивирующими течениями, которые поражают...
Холедохолитиаз камни в желчных протоках операция — диагностика и лечение в СПб
Лечение желчнокаменной болезни Желчнокаменная болезнь – проблема, которая тревожит большую часть населения. Основным контингентом пациентов являются люди, с избыточной массой...
Холензим — инструкция по применению, описание, отзывы пациентов и врачей, аналоги
Холензим в Москве Холензим Инструкция по применению Цена на Холензим от 253.00 руб. в Москве Купить Холензим в Москве можно...
Хронический гломерулонефрит; Клинические протоколы МЗ РК — 2014; MedElement
Гломерулонефрит у детей: общие характеристики, симптомы, лечение и прогноз Общеклинические аспекты Механизм развития и частые причины Основная классификация По типу...
Adblock detector